品名：液体样本总蛋白提取试剂盒

品牌：鑫泉科技（Sin-troch）

货号： XQ-P1255

规格：100T             

【描述】

本试剂盒能够在 15 分钟内对液体样品中的蛋白进行提取浓缩，或脱盐、脱去垢剂、脱还 原剂等。适用于各种液体样品(10µL～1L)，如蛋白溶液、胞浆胞核蛋白提取液、细胞或微生物培 养基上清液、血液、尿液、脑脊液等各种体液； 也适于从细胞悬液提取总蛋白。蛋白回收率 95- 100%，远高于经典的丙酮或三氯醋酸沉淀法， 且可有效去除样品中的脂质， 不影响后续 SDS-PAGE 和 Western Blot 等生物实验。可用 1.5ml 离心管微量提取也可大规模制备， 简便高效。【性状】

浅黄色澄清液体，有少量蛋白质析出

【组成和保存】

浓缩试剂 50ml，适用 100x 100μl 次浓缩提取。室温保存。

【适用样品】

    1.  液体样品如蛋白溶液、胞浆胞核蛋白提取液、细胞或微生物培养基上清液、血液、 尿液、脑脊液等各种体液。2.  原代或传代细胞悬液，可按液体方式提取总蛋白。

【蛋白提取程序】

微量提取加样量及比例  

液体蛋白样品 (μl)            10     100             150

提取试剂 (μl)                50            500            750

H2O (μl)                     30            300            450

1.     每 100μl 液体蛋白样品，按比例加 5 倍体积(500μl)  提取试剂，振荡混匀，室温静置 3 分钟。 蛋白浓度较高时，会很快发生凝集导致溶液混浊。

2.      10,000g 4℃离心 3 分钟。 蛋白浓度较高时可省略此步骤。

3.     打开管口，加入 3 倍体积(300 μl)的纯水， 振荡混匀。

4.     10,000g  4℃离心 3 分钟。溶液分为两相。蛋白在两相中间，浓度高时会形成薄膜状或沉淀 于管底；浓度低时则肉眼难以看到。

5.     小心吸取上层相，弃去。注意应该保留一定量的上层相，以免吸走中间相的蛋白膜。

6.     加入 500 μl  无水乙醇，振荡洗涤沉淀。 10,000g 4℃离心 2 分钟。弃上清，再次瞬时离心数 秒并吸去管内液体。勿触动管底的蛋白沉淀(量少时沉淀不可见)。

7.      敞开管口，空气自然干燥。

8.     根据样品蛋白初始浓度，加适量双蒸水或上样缓冲液， 95℃煮 5 分钟溶解蛋白沉淀。

【注意】

 1.    可室温操作。 1 μg/ml 总蛋白可被有效沉淀，更低浓度的蛋白可加入白蛋白做载体帮助沉淀。 可有效去除液体样品中的盐(1M)、还原剂(1%巯基乙醇或 DTT)、去垢剂(5%SDS 、1% Triton  X- 100 、1% NP-40、油脂等。如果上述成分浓度过高， 用水稀释后进行提取。干燥蛋白沉淀 可 4℃或－20℃长期保存。

2.    血浆蛋白或疏水蛋白溶解较慢， 反复数次 95℃煮并加以－20℃冻融可助溶。必要时 4℃溶解 过夜，或用 2% SDS 溶解沉淀， 95℃煮，然后离心去除不溶解物。

3.    如定量蛋白应使用不含溴酚蓝的凝胶上样缓冲液溶解沉淀，蛋白定量后再加入溴酚蓝。

4.    提取培养细胞总蛋白：用蒸馏水或 1% SDS 制备一定体积的细胞悬液， 振荡裂解细胞， 然后 执行上述液体样品蛋白提取程序。

5.    实体组织的蛋白提取可使用XQ-P1250 实体组织和细胞蛋白抽提试剂盒。

6.    提取试剂有刺激性， 一旦接触立即用水清洗。

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